e-magazine - page 43

Food FocusThailand
OCTOBER 2015 43
เอกสารอ้างอิง/References
ภาควิชาชีวเคมี คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลั ยขอนแก่น. เข้าถึงได้ที่ เว็บไซต์ https://sites .
google.com/a/kku.ac.th/carotenoids-kku/home/kar-yaek-brisuththi-khae-ro-thi-
nxyd
การสกัดและโครมาโทกราฟี. เข้าถึงได้ที่ เว็บไซต์ www.academia.edu
For example, adsorption column chromatography is suitable for the
purification of carotenoids. Alumina or silica is usually used in
preparing thepack column.Magnesiumoxideor calcium carbonate
can be usedaswell.
Aluminausedasanadsorbent for purifying carotenoidswill use
aluminaactivitygrade IIor III,whichwillhaveawatercontentofabout
3percentor6,andwhichcanbepreparedbyaddingwater toalumina
activitygrade I. Then thealumina ispreparedas slurrywithhexane.
The slurry gel will then be poured to a height of about 15 cm in a
glass column with a diameter of 1.5 cm. Before filling the column
withaluminagel, thebottomof thecolumnneeds tobepluggedwith
cottonwool toprevent theoutflowof aluminagel from theendof the
glass tube.
Columnsmust havenoair bubblesor cracks in thegel;must not
bepacked too tightly; andmust not beallowed todryout, which can
be caused by the solvent evaporating or running out off the bottom
of thecolumn’s improperlyclosedstopcock.Carefullyandgently load
ซึ่ งเหมาะส�ำหรับการแยกบริ สุทธิ์แคโรทีนอยด์ โดยมั กจะใช้อะลูมินา (Alumina)
หรือซิลิกาในการเตรียมบรรจุคอลัมน์ (Pack column) นอกจากนั้นยังสามารถใช้
แมกนีเซียมออกไซด์ (Magnesium oxide) หรือแคลเซียมคาร์ บอเนต (Calcium
carbonate) ได้เช่นกัน
อะลูมินาที่จะใช้เป็นตัวดูดซั บเพื่อแยกบริสุทธิ์แคโรที นอยด์นั้นจะใช้ Alumina
activity II หรือ III ซึ่งจะมีน�้ำเป็นองค์ประกอบประมาณร้ อยละ 3 หรือ 6 สามารถ
เตรียมได้โดยการเติมน�้ำลงใน Alumina activity I จากนั้ นเตรียมอะลูมินาให้เป็น
สารละลายที่มีลักษณะข้น (Slurry)ด้วยเฮกเซน (Hexane)แล้วบรรจุลงในคอลัมน์
แก้วขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 1.5 เซนติเมตร ให้ได้ความสูงของเนื้อเจล ประมาณ
15 เซนติ เมตร ก่อนการบรรจุลงในคอลัมน์ อุดปลายคอลัมน์ด้วยส�ำลีให้ เรียบร้อย
เพื่อป้องกันการไหลออกของอะลูมินาเจลที่ด้านปลายของหลอดแก้ว
คอลั มน์ที่ดีต้ องไม่มีฟองอากาศ หรือรอยแตกของเนื้อเจล ไม่ถูกอัดแน่ นจน
เกินไปไม่ถูกปล่ อยให้แห้งซึ่งเกิดได้จากตัวท�ำละลายระเหยออกหมดหรือไม่ปิดก๊อก
คอลัมน์ (Stopclock) โหลดตัวอย่างแคโรที นอยด์ที่เข้มข้นด้วยปริมาตรน้อยที่ สุด
เท่าที่จะเตรี ยมได้อย่างระมัดระวังไปบนคอลัมน์เบาๆแล้วค่อยๆชะด้วยปิโตรเลี ยม
อีเทอร์ จนแถบสีเหลืองเริ่มมี การแยกออก ให้ชะคอลัมน์ต่ อไปจนแถบสีเหลือง
แถบแรกหลุดออกมาแล้วค่อยเปลี่ยนตั วชะที่มีขั้ วมากขึ้นเป็นไดเอทิลอี เทอร์ความ-
เข้มข้นร้อยละ 5 ในปิ โตรเลียมอีเทอร์ สังเกตดูว่ ามีการชะแถบสีเหลื องออกมา
อีกหรือเปล่าแล้วค่อยชะด้วยตั วท�ำละลายเคลื่อนที่ ที่มีขั้ วมากขึ้น เช่นไดเอทิลอีเทอร์
ความเข้ มข้นร้อยละ 10-20 ในปิ โตรเลียมอีเทอร์ เป็นต้ น เราสามารถตรวจสอบ
ความบริ สุทธิ์ ของแคโรทีนอยด์เบื้องต้นด้ วยการสแกนดูแถบสี (Spectrum) ของ
แต่ละส่วนที่แยกได้ (Fraction)
Solvent CarotenoidGroupsEluted
Petroleumether
5%Diethyl ether/petroleum
10%Diethyl ether/petroleum
20-30%Diethyl ether/petroleum ether
50-60%Diethyl ether/petroleum
Diethyl ether or 5% ethanol/diethyl ether
20%Ethanol/ether or ethyl acetae/propan-2-ol/water
Carotene hydrocarbons
Carotene epoxides
Xanthophylls esters
Monooxocarotenoids, monomethoxy-,
and dimethoxycarotenoids
Monohydroxy-, and dioxocarotenoids
Di-, and trihydroxy carotenoids, xanthophylls epoxides
Tetrahydroxycarotenoids and carotenoids glycoside
ระบบตัวท�ำละลายที่นิยมใช้ส�ำหรับการแยกสารบริสุทธิ์ด้วยคอลัมน์โครมาโทกราฟี
TheSolvent Systems for ColumnChromatography
as small amount as can be prepared of the concentrated carotenoid
sample onto the top of the column. Then slowly elutewith petroleum
ether until the yellow band begins to separate out. Continue to elute
thecolumnuntil thefirst yellowband isseparatedout. Thengradually
substitutewithamorepolareluent suchasdiethyl ether concentration
of 5 per cent in petroleum ether. Observe if there is further elution of
theyellowbandornot.Thengraduallyelutewithahigherpolarmobile
solvent such as diethyl ether with a concentration of 10–20 per cent
inpetroleumether.Thepurityof carotenoidscan thenbecheckedwith
a preliminary scan of the spectrum’s color bands for the isolated
fractions.